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                    Lowry法(Folin酚法)原理及优缺点
                    双击自动滚屏 发布者:dindin 发布时间: 阅读:7524

                    基本原理

                    Lowry法蛋白质测定法是最灵敏的方法之一。过去此法是应用最广泛的一种方法,由于其试剂乙的配?#24179;?#20026;困难(现在已可以在本公司订?#28023;?#36817;年来逐渐被考马斯亮兰法所取代。此法的显色原理与双缩脲方法是相同的,只是加入了第二种试剂,即Folin—酚试剂,以增加显色量,从而提高了检测蛋白质的灵敏?#21462;?#36825;两种显色反应产生深兰色的原因是:在碱性条件下,蛋白质中的肽键与铜结合生成复合物。 Folin—酚试剂中的?#26368;?#37240;盐磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸和苯丙氨酸残基还原,产生深兰色(钼兰和钨兰的混合物)。在一定的条件下,兰色深度与蛋白的量成正?#21462;?/SPAN>

                    优缺点

                    Folin—酚试剂法最早由Lowry确定了蛋白质浓度测定的基本步骤。以后在生物化学领域得到广泛的应用。这个测定法的优点是灵敏度高,?#20154;?#32553;脲法灵敏得多,缺点是费时间较长,要精确控制操作时间,标准曲线也不是严格的直线?#38382;劍?#19988;专一性较差,干扰物?#24335;?#22810;。对双缩脲反应发生干扰的离子,同样容易干扰Lowry反应。而且对后者的影响?#25346;?#22823;得多。酚类、柠檬酸、硫酸铵、Tris缓冲液、甘氨酸、糖类、甘油等均有干扰作用。浓度?#31995;?#30340;尿素(0.5%),硫酸纳(1%),硝酸纳(1%),三氯乙酸(0.5%),乙醇(5%),乙醚(5%),丙酮(0.5%)?#28909;?#28082;对显色无影响,但这些物质浓度高时,必须作校正曲线。含硫酸铵的溶?#28023;?#21482;须?#20248;?#30899;酸钠氢氧化钠溶?#28023;纯上?#33394;测定。若样品酸度较高,显色后会色?#24120;?#21017;必须提高碳酸钠氢氧化钠溶液的浓度1~2倍。

                    注意事项

                    进行测定时,加F olin—酚试剂时要特别小心,因为该试剂仅在酸性pH条件下稳定,但上述还原反应只在pH=10的情况下发生,?#23454;?/FONT>Folin一酚试剂加到碱性的铜蛋白质溶液中时,必须立即混匀,?#21592;?#22312;?#26368;?#37240;磷钨酸试剂 被破坏之前,还原反应即能发生。

                    此法也适用于酪氨酸和色氨酸的定量测定,此法可检测的最低蛋白质量达0.05mg/mL

                     
                     

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